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日志

培养基及其制备方法

已有 741 次阅读2008-4-2 22:38 |个人分类:专业知识

  培养基应通过质量鉴定,适合规定菌的生长,并使其具有典型菌落形态特征或典型生化反应特性。可按下列处方配制,亦可用符合规定的脱水培养基制备。配制培养基g扣馀另有规定外,培养基制备的高压蒸汽灭菌温度为121℃ 15min。  
  1.1 营养肉汤培养基
  胨     10g   牛肉浸出粉   3g
  氯化钠   5g   水   1000ml
  取上述成分,混合,微温溶解后,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,灭菌。
  1.2 营养琼脂培养基
  照上述营养肉汤培养基的处方及制法,加入14g琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,
灭菌。
  1.3 半固体营养琼脂培养基
  照上述营养琼脂培养基的处方及制法,其中琼脂加入量为0.3%~0.5%。
  1.4 玫瑰红钠琼脂培养基
  胨     5g   玫瑰红钠   0.0133g
  葡萄糖   10g   (或0.133%玫瑰红钠溶液 10ml)
  磷酸二氢钾(KHzPO+)   lg   琼脂   14g
  硫酸镁(MgSO4•7H20) 0.5g   水   1000ml
  除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
  1.5 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)
  胨       10g   琼脂   14g
  酵母浸出粉   5g   水   1000ml
  葡萄糖   10g
  除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。
  1.6 胆盐乳糖培养基(BL)
  胨       20g   磷酸二氢钾(KH2PO4)   1.3g
  乳糖     5g   牛胆盐(或去氧胆酸钠0.25g)   1.3g
  氯化钠     5g   水   1000ml
  磷酸氢二钾(K2HPO4)   lg
  除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热溶解后,调节pH使灭菌后为7.2±0,2,煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
  1.7 4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸蛋白胨培养基
  胨       10g   磷酸二氢钾(无水KH2PO4)   0.9g
  氯化钙   50mg   磷酸氢二钠(无水Na2HPO:)   6.2g
  硫酸锰   0.5mg 硫酸钠   40mg
  硫酸锌   0.5mg 去氧胆酸钠   1g
  硫酸镁   0.1g   4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸   75mg
  氯化钠   10g   水   1000ml
  除4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸外,上述各成分溶解于1000ml水中,调节pH使灭菌后为
7.3±0.1,加人4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸,溶解后,每管分装5ml,115灭菌20min。
  1.8 曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)
  营养琼脂培养基 100ml   曙红钠指示液   2ml
  20%乳糖溶液     5ml   甲蓝指示液   1.3~1.6ml
  取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60~C,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀,倾注平皿。
  1.9 麦康凯琼脂培养基(MacC)
  胨     20g   1%中性红指示液   2.5ml
  乳糖   10g   琼脂   14g
  牛胆盐   5g   氯化钠   5g
  水   1000ml
  除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
  1.10 三糖铁琼脂培养基(TSl)
  胨       20g   硫酸亚铁   0.2g
  牛肉浸出粉   5g   硫代硫酸钠   0.2g
  乳糖       10g   0.2%酚磺酞指示液   12.5ml
  蔗糖       10g   琼脂   14g
  葡萄糖     1g   氯化钠   5g
  水   1000ml
  除三糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,制成高底层(2~3cm)短斜面。
  1.11 四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)
  胨     5g   硫代硫酸钠   30g
  牛胆盐   1g   碳酸钙   10g
  水   1000ml
  加入上述成分,混合,微温溶解,灭菌。
  临用前,取上述培养基混匀分装,每10ml加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g,溶于20ml水中)0.2ml和亮绿试液0.1ml,混匀。
  1.12 沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)
  胨         5g   硫代硫酸钠   8.5g
  牛肉浸出粉   5g   中性红指示液   2.5ml
  乳糖       10g   亮绿试液   0.33ml
  牛胆盐     8.5g   琼脂   14g
  枸橼酸钠   8.5g   枸橼酸铁铵   1g
  水       1000ml
  除乳糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,冷至60℃,倾注平皿。
  1.13 胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)
  胨       20g   枸橼酸钠   1g
  牛肉浸出粉   3g   枸橼酸铁铵   1g
  乳糖       10g   中性红指示液     3ml
  蔗糖       10g   琼脂   14g
  去氧胆酸钠   1g   硫代硫酸钠   2.3g
  水   1000ml
  除糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0,l,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,冷至60℃,倾注平皿。
  1.14 溴代十六烷基三甲胺琼脂培养基
  胨       10g   溴代十六烷基三甲胺   0.3g
  牛肉浸出粉   3g   琼脂   14g
  氯化钠     5g   水   1000ml
  除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.5±0.1,加入琼脂,加热溶化后,分装,灭菌,冷 60℃,倾注平皿。
  1.15   碲酸盐肉汤培养基
  临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)试液
0.2ml,混匀,即得。
  1.16 卵黄氯化钠肉汤培养基  
  胨         6.0g   10%氯化钠卵黄液   100ml
  牛肉浸出粉   1.8g   琼脂   23g
  氯化钠   30g   水   650ml
  除10%氯化钠卵黄液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.6±0.1,灭菌,待冷至60℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分混匀,勿振摇,倾注平皿。
  10%氯化钠卵黄液的制备 取新鲜鸡蛋1个,以无菌操作取出卵黄,放入10%氯化钠溶液100ml中,充分混匀。
  5,17 甘露醇氯化钠琼脂培养基
  胨       10g   酚磺酞指示液   2.5ml
  牛肉浸出粉   1g   琼脂   14g
  甘露醇     10g   氯化钠   75g
  水     1000ml
  除甘露醇、指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4±0.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
  1.18 蛋白胨水培养基
  胰蛋白胨   10g   氯化钠   5g
  水     1000ml
  取上述成分混合,加热溶化,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。
  1.19 磷酸盐葡萄糖胨水培养基
  胨     7g   磷酸氢二钾(K2HPO4)   3.8g
  葡萄糖   5g   水   1000ml
  取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。
  1.20 枸橼酸盐培养基
  氯化钠           5g   枸橼酸钠(无水)   2g
  硫酸镁(MgS04•7H2O) 0.2g   溴麝香草酚蓝指示液   20ml
  磷酸氢二钾(K2HPO4)     1g   琼脂   14g
  硫酸二氢铵(NH4H2PO4)   lg   水   1000ml
  除指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为6.9±0.1,加入琼脂,加热溶化,加入指示液,混匀。分装于小试管,灭菌,制成斜面。
  注:所用琼脂应不含游离糖,用前用水浸泡冲洗。
  1.21 糖、醇发酵培养基
  基础液 胨   10g   酸性晶红指示液   10ml
  糖、醇0.5%   (或溴麝香草酚蓝指示液6ml)
  氯化钠   5g   水   1000ml
  取胨和氯化钠加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4,加入指示液,混匀。分装每瓶100ml,灭菌。
  配制葡萄糖发酵培养基时,于。100ml基础液加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管(Durham)的小试管中,灭菌。配制其它糖、醇发酵培养基时,将各种糖、醇分别配成l0%溶液,与基础液同时灭菌。以无菌操作将5ml糖、醇溶液加入100ml基础液内,分装于灭菌小试管中。
  注:糖、醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
  1.22 5%乳糖培养基
  胨       0.2g   溴麝香草酚蓝指示液   6ml
  氯化钠   0.2g   乳糖   5g
  磷酸氢二钠 0.2g   水     100ml
  除乳糖和指示液外,混合各成分,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4,加入乳糖/指示液,混匀,分装于含小倒管的灭菌小试管中,115℃灭菌15min。
  1.23 脲(尿素)琼脂培养基
  胨       1g   酚磺酞指示液   6ml
  葡萄糖   0.2g   20%无菌脲溶液   100ml
  氯化钠     5g   琼脂         14g
  磷酸二氢钾(KHzPO4)   2g   水   900ml
  除脲和琼脂外,取上述成分混合,调节pH使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热溶化并分装于锥形瓶,灭菌。冷至50~55℃,加入灭菌脲溶液,混匀,分装于灭菌试管中,制成斜面。
  1.24 氰化钾培养基
  胨     3g             磷酸氢二钠(Na2HPO4)   5.64g
  氯化钠   5g             氰化钾试液   15ml
  磷酸二氢钾(KH2PO4)   0.225g 水   1000ml
  除氰化钾试液外,取上述成分混合,调节pH使灭菌后为7.5±0.1,灭菌,冷却后,加入氰化钾试液,分装于12mm×100mm灭菌试管内,每管4ml,立即用灭菌橡胶塞塞紧,置4℃保存。同时,不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基,分装于灭菌试管中。
  1.25 赖氨酸脱羧酶试验培养基
  胨       5g   1.6%甲酚紫指示液   lml
  酵母浸出粉   lg   L-赖氨酸(DL-赖氨酸)   0. 5(1)g
  葡萄糖     1g   水   1000ml
  除赖氨酸外,取上述成分混合,加热溶解后,加ykL-赖氨酸(DL-赖氨酸),调节pH使灭菌后为6.8,同时以不加赖氨酸培养基作为对照培养基管,分装于灭菌的小试管内,每管2.5ml,并滴加一层液体石蜡,121℃灭菌10min。
  1.26 绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂)
  胨           20g   甘油   10ml
  氯化镁(无水)   1.4g   琼脂   14g
  硫酸钾(无水)     10g   水   1000ml
  取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入甘油和琼脂,加热溶化,混匀,分装于试管,灭菌,制成斜面。
  1.27 明胶培养基
  胨         5g   明胶   120g
  牛肉浸出粉   3g   水   1000ml
  取上述成分加入水中,浸泡约20min,随时搅拌,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,每支4~5ml,灭菌。放冷后置冰箱保存。
  1.28 硝酸盐胨水培养基
  胨       10g   硝酸钠   0.5g
  酵母浸出粉   3g   水   1000ml
  硝酸钾     2g
  取胨和酵母浸出粉加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解,混匀。分装于含杜氏管的小试管,灭菌。
  1.29 庖肉培养基
  牛肉碎块的制备新鲜牛肉,除去脂肪及筋腱,加水煮沸约10min,切成约5mm3的小块,称重,按1;3(肉:水)加蒸馏水。置4~10C浸泡18~20h,煮沸1h,用纱布过滤(滤液即为1:3牛肉浸液),肉渣以自来水漂洗2次,然后,加入适量氢氧化钠液,搅拌,使pH在8.4左右,浸泡过夜,次日倾去上层水,用蒸馏水冲洗2~3次,放在纱布上,自然沥干(不要挤压)。将牛肉渣铺在搪瓷盘上,灭菌,于80~l00℃烘干,筛去碎屑,保持干燥,装瓶,备用。
  庖肉培养基的制备 将上述碎肉块装入中试管或大试管内,约lcm高,再加入营养肉汤约lOml或40ml,灭菌,备用,最终pH应为7.3±0.1。
  1.30 0.1%葡萄糖庖肉培养基
  于庖肉培养基灭菌前加入0.1%葡萄糖分装大试管,每支40ml,灭菌备用。用于破伤风梭菌增菌产毒培养。
  1.31 血琼脂培养基
  营养琼脂   100ml   无菌脱纤维兔血(或羊血)   5~10ml
  制法 将营养琼脂培养基加热溶化,待冷至50℃左右,以无菌操作吸取无菌脱纤维兔血或羊血加入摇匀,制成平板,置冰箱备用。
  1.32 胆盐乳糖发酵培养基
  蛋白胨   20g   0.04%溴甲酚紫   25ml
  乳糖     l0g   水   1000ml
  脱氧胆酸钠   0.25g
  除指示剂外,取上述成分加至水中,微温溶解,调pH值至灭菌后7.2~7,5,加入指示剂,分装中管,每管lOml,加一倒管。115℃灭菌30min。
  1.33 乳糖发酵培养基
  蛋白胨   20g   0.04%溴甲酚紫   25ml
  乳糖     l0g   水   1000ml
  除指示剂外,取上述成分加至水中,微温溶解,调pH值使灭菌后为7.2~7.4,加入指示剂,分装小管,每管3ml,加一倒管,115℃灭菌30min。  
  1.34 哥伦比 (Columbia)琼脂培养基
  胰酪胨     log   玉米淀粉   1s
  肉胃消化物   5g   氯化钠   5g
  心胰酶消化物 3g   琼脂(按凝固力)   12~15g
  酵母浸出粉   5g   水   1000ml
  称上述成分,加水,摇匀,加热至沸。如必要,调pH使灭菌后为7.1~7.5。121℃灭菌15min。冷至40~50℃,必要时加硫酸庆大霉素相当于庆大霉素20mg,摇匀,注皿。

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