培养基及其制备方法
已有 741 次阅读2008-4-2 22:38
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培养基应通过质量鉴定,适合规定菌的生长,并使其具有典型菌落形态特征或典型生化反应特性。可按下列处方配制,亦可用符合规定的脱水培养基制备。配制培养基g扣馀另有规定外,培养基制备的高压蒸汽灭菌温度为121℃ 15min。
1.1 营养肉汤培养基
胨 10g 牛肉浸出粉 3g
氯化钠 5g 水 1000ml
取上述成分,混合,微温溶解后,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,灭菌。
1.2 营养琼脂培养基
照上述营养肉汤培养基的处方及制法,加入14g琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,
灭菌。
1.3 半固体营养琼脂培养基
照上述营养琼脂培养基的处方及制法,其中琼脂加入量为0.3%~0.5%。
1.4 玫瑰红钠琼脂培养基
胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g
葡萄糖 10g (或0.133%玫瑰红钠溶液 10ml)
磷酸二氢钾(KHzPO+) lg 琼脂 14g
硫酸镁(MgSO4•7H20) 0.5g 水 1000ml
除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
1.5 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)
胨 10g 琼脂 14g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
葡萄糖 10g
除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖,分装,灭菌。
1.6 胆盐乳糖培养基(BL)
胨 20g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g
乳糖 5g 牛胆盐(或去氧胆酸钠0.25g) 1.3g
氯化钠 5g 水 1000ml
磷酸氢二钾(K2HPO4) lg
除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热溶解后,调节pH使灭菌后为7.2±0,2,煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
1.7 4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸蛋白胨培养基
胨 10g 磷酸二氢钾(无水KH2PO4) 0.9g
氯化钙 50mg 磷酸氢二钠(无水Na2HPO:) 6.2g
硫酸锰 0.5mg 硫酸钠 40mg
硫酸锌 0.5mg 去氧胆酸钠 1g
硫酸镁 0.1g 4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸 75mg
氯化钠 10g 水 1000ml
除4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸外,上述各成分溶解于1000ml水中,调节pH使灭菌后为
7.3±0.1,加人4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸,溶解后,每管分装5ml,115灭菌20min。
1.8 曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)
营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml 甲蓝指示液 1.3~1.6ml
取营养琼脂培养基,加热溶化后,冷至60~C,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀,倾注平皿。
1.9 麦康凯琼脂培养基(MacC)
胨 20g 1%中性红指示液 2.5ml
乳糖 10g 琼脂 14g
牛胆盐 5g 氯化钠 5g
水 1000ml
除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
1.10 三糖铁琼脂培养基(TSl)
胨 20g 硫酸亚铁 0.2g
牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g
乳糖 10g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g 琼脂 14g
葡萄糖 1g 氯化钠 5g
水 1000ml
除三糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,制成高底层(2~3cm)短斜面。
1.11 四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)
胨 5g 硫代硫酸钠 30g
牛胆盐 1g 碳酸钙 10g
水 1000ml
加入上述成分,混合,微温溶解,灭菌。
临用前,取上述培养基混匀分装,每10ml加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g,溶于20ml水中)0.2ml和亮绿试液0.1ml,混匀。
1.12 沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)
胨 5g 硫代硫酸钠 8.5g
牛肉浸出粉 5g 中性红指示液 2.5ml
乳糖 10g 亮绿试液 0.33ml
牛胆盐 8.5g 琼脂 14g
枸橼酸钠 8.5g 枸橼酸铁铵 1g
水 1000ml
除乳糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,冷至60℃,倾注平皿。
1.13 胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)
胨 20g 枸橼酸钠 1g
牛肉浸出粉 3g 枸橼酸铁铵 1g
乳糖 10g 中性红指示液 3ml
蔗糖 10g 琼脂 14g
去氧胆酸钠 1g 硫代硫酸钠 2.3g
水 1000ml
除糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.2±0,l,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,冷至60℃,倾注平皿。
1.14 溴代十六烷基三甲胺琼脂培养基
胨 10g 溴代十六烷基三甲胺 0.3g
牛肉浸出粉 3g 琼脂 14g
氯化钠 5g 水 1000ml
除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.5±0.1,加入琼脂,加热溶化后,分装,灭菌,冷 60℃,倾注平皿。
1.15 碲酸盐肉汤培养基
临用前,取灭菌的营养肉汤培养基,每100ml加入新配制的1%亚碲酸钠(钾)试液
0.2ml,混匀,即得。
1.16 卵黄氯化钠肉汤培养基
胨 6.0g 10%氯化钠卵黄液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g 琼脂 23g
氯化钠 30g 水 650ml
除10%氯化钠卵黄液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.6±0.1,灭菌,待冷至60℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分混匀,勿振摇,倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备 取新鲜鸡蛋1个,以无菌操作取出卵黄,放入10%氯化钠溶液100ml中,充分混匀。
5,17 甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨 10g 酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1g 琼脂 14g
甘露醇 10g 氯化钠 75g
水 1000ml
除甘露醇、指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4±0.2,加入琼脂,加热溶化后,滤过,分装,灭菌,冷至60℃,倾注平皿。
1.18 蛋白胨水培养基
胰蛋白胨 10g 氯化钠 5g
水 1000ml
取上述成分混合,加热溶化,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。
1.19 磷酸盐葡萄糖胨水培养基
胨 7g 磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.8g
葡萄糖 5g 水 1000ml
取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。
1.20 枸橼酸盐培养基
氯化钠 5g 枸橼酸钠(无水) 2g
硫酸镁(MgS04•7H2O) 0.2g 溴麝香草酚蓝指示液 20ml
磷酸氢二钾(K2HPO4) 1g 琼脂 14g
硫酸二氢铵(NH4H2PO4) lg 水 1000ml
除指示液和琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH使灭菌后为6.9±0.1,加入琼脂,加热溶化,加入指示液,混匀。分装于小试管,灭菌,制成斜面。
注:所用琼脂应不含游离糖,用前用水浸泡冲洗。
1.21 糖、醇发酵培养基
基础液 胨 10g 酸性晶红指示液 10ml
糖、醇0.5% (或溴麝香草酚蓝指示液6ml)
氯化钠 5g 水 1000ml
取胨和氯化钠加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4,加入指示液,混匀。分装每瓶100ml,灭菌。
配制葡萄糖发酵培养基时,于。100ml基础液加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管(Durham)的小试管中,灭菌。配制其它糖、醇发酵培养基时,将各种糖、醇分别配成l0%溶液,与基础液同时灭菌。以无菌操作将5ml糖、醇溶液加入100ml基础液内,分装于灭菌小试管中。
注:糖、醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
1.22 5%乳糖培养基
胨 0.2g 溴麝香草酚蓝指示液 6ml
氯化钠 0.2g 乳糖 5g
磷酸氢二钠 0.2g 水 100ml
除乳糖和指示液外,混合各成分,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.4,加入乳糖/指示液,混匀,分装于含小倒管的灭菌小试管中,115℃灭菌15min。
1.23 脲(尿素)琼脂培养基
胨 1g 酚磺酞指示液 6ml
葡萄糖 0.2g 20%无菌脲溶液 100ml
氯化钠 5g 琼脂 14g
磷酸二氢钾(KHzPO4) 2g 水 900ml
除脲和琼脂外,取上述成分混合,调节pH使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂,加热溶化并分装于锥形瓶,灭菌。冷至50~55℃,加入灭菌脲溶液,混匀,分装于灭菌试管中,制成斜面。
1.24 氰化钾培养基
胨 3g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 5.64g
氯化钠 5g 氰化钾试液 15ml
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.225g 水 1000ml
除氰化钾试液外,取上述成分混合,调节pH使灭菌后为7.5±0.1,灭菌,冷却后,加入氰化钾试液,分装于12mm×100mm灭菌试管内,每管4ml,立即用灭菌橡胶塞塞紧,置4℃保存。同时,不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基,分装于灭菌试管中。
1.25 赖氨酸脱羧酶试验培养基
胨 5g 1.6%甲酚紫指示液 lml
酵母浸出粉 lg L-赖氨酸(DL-赖氨酸) 0. 5(1)g
葡萄糖 1g 水 1000ml
除赖氨酸外,取上述成分混合,加热溶解后,加ykL-赖氨酸(DL-赖氨酸),调节pH使灭菌后为6.8,同时以不加赖氨酸培养基作为对照培养基管,分装于灭菌的小试管内,每管2.5ml,并滴加一层液体石蜡,121℃灭菌10min。
1.26 绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂)
胨 20g 甘油 10ml
氯化镁(无水) 1.4g 琼脂 14g
硫酸钾(无水) 10g 水 1000ml
取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入甘油和琼脂,加热溶化,混匀,分装于试管,灭菌,制成斜面。
1.27 明胶培养基
胨 5g 明胶 120g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
取上述成分加入水中,浸泡约20min,随时搅拌,加热溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,每支4~5ml,灭菌。放冷后置冰箱保存。
1.28 硝酸盐胨水培养基
胨 10g 硝酸钠 0.5g
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
硝酸钾 2g
取胨和酵母浸出粉加入水中,微温溶解,调节pH使灭菌后为7.3±0.1,加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解,混匀。分装于含杜氏管的小试管,灭菌。
1.29 庖肉培养基
牛肉碎块的制备新鲜牛肉,除去脂肪及筋腱,加水煮沸约10min,切成约5mm3的小块,称重,按1;3(肉:水)加蒸馏水。置4~10C浸泡18~20h,煮沸1h,用纱布过滤(滤液即为1:3牛肉浸液),肉渣以自来水漂洗2次,然后,加入适量氢氧化钠液,搅拌,使pH在8.4左右,浸泡过夜,次日倾去上层水,用蒸馏水冲洗2~3次,放在纱布上,自然沥干(不要挤压)。将牛肉渣铺在搪瓷盘上,灭菌,于80~l00℃烘干,筛去碎屑,保持干燥,装瓶,备用。
庖肉培养基的制备 将上述碎肉块装入中试管或大试管内,约lcm高,再加入营养肉汤约lOml或40ml,灭菌,备用,最终pH应为7.3±0.1。
1.30 0.1%葡萄糖庖肉培养基
于庖肉培养基灭菌前加入0.1%葡萄糖分装大试管,每支40ml,灭菌备用。用于破伤风梭菌增菌产毒培养。
1.31 血琼脂培养基
营养琼脂 100ml 无菌脱纤维兔血(或羊血) 5~10ml
制法 将营养琼脂培养基加热溶化,待冷至50℃左右,以无菌操作吸取无菌脱纤维兔血或羊血加入摇匀,制成平板,置冰箱备用。
1.32 胆盐乳糖发酵培养基
蛋白胨 20g 0.04%溴甲酚紫 25ml
乳糖 l0g 水 1000ml
脱氧胆酸钠 0.25g
除指示剂外,取上述成分加至水中,微温溶解,调pH值至灭菌后7.2~7,5,加入指示剂,分装中管,每管lOml,加一倒管。115℃灭菌30min。
1.33 乳糖发酵培养基
蛋白胨 20g 0.04%溴甲酚紫 25ml
乳糖 l0g 水 1000ml
除指示剂外,取上述成分加至水中,微温溶解,调pH值使灭菌后为7.2~7.4,加入指示剂,分装小管,每管3ml,加一倒管,115℃灭菌30min。
1.34 哥伦比 (Columbia)琼脂培养基
胰酪胨 log 玉米淀粉 1s
肉胃消化物 5g 氯化钠 5g
心胰酶消化物 3g 琼脂(按凝固力) 12~15g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
称上述成分,加水,摇匀,加热至沸。如必要,调pH使灭菌后为7.1~7.5。121℃灭菌15min。冷至40~50℃,必要时加硫酸庆大霉素相当于庆大霉素20mg,摇匀,注皿。