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日志

魔鬼与天使的化身:溴化乙啶

已有 755 次阅读2008-4-2 21:43 |个人分类:专业知识

分子式:C21H20BrN3,为芳香族荧光化合物

英文名:Ethidium bromide 简称EB

分子量: 394.3139 g/mol

熔点:260 - 262 °C

EBEthidium bromide,溴化乙锭)溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。

化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性

观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm366nm的光辐射。这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ngNDA条带

废弃溴化乙锭EB净化和处理方法

实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题,如何做到标准处理?

1 严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性,而且易挥发,挥发至空气中,危害很大。

EB溶液的处理方法

 (1)  对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理: 

      a. EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml 

      b. 加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时; 

      c. 加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。 

 (2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理: 

     a. 1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时; 

     b. 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

3 EB接触物,如抹布,枪头。一般回收至黑色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理。


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